如何在安捷伦Seahorse XF HS迷你板中接种贴壁细胞

首页    如何在安捷伦Seahorse XF HS迷你板中接种贴壁细胞

设计Seahorse XF HS迷你板的目的是每孔可使用更少细胞进行XF分析,以便对非增殖细胞或数量有限的细胞进行功能分析。孔的接种面积为0.031cm2,约为标准XFp(或XFe96)细胞培养板接种面积的30%

XF HS迷你板为一块8孔细胞培养板,每个孔的中心有一个凸起的环状元件(1A)XF HS迷你板经过组织培养处理和γ射线照射。每块XF HS迷你板均预装有硅胶细胞接种遮罩和板盖。每包还配有一个遮罩拆卸工具(1B)。本文将介绍在安捷伦XF HS迷你板中接种贴壁细胞的流程。

1. (A) XF HS迷你板的环状元件圈出了更小的细胞接种区域。(B) 每个板均预装有硅胶细胞接种遮罩、XF HS 迷你板板盖,以及可重复使用的遮罩拆卸工具

接种细胞

1.取出XF HS迷你板,揭下密封箔,待用;

2.在细胞培养孔周围的水槽中加入无菌水或PBS(2)

a.8通道移液器设为200 µL,填充水槽两侧(每个水槽容纳两个吸头)

b.如果没有多通道移液器,向每个水槽中加入400µL无菌水或PBS(3200µL)

2.使用8通道移液器将溶液加入板孔两侧的水槽中。

3.确定预期接种浓度。最佳细胞接种数量可能差别很大,但通常为每孔1.0 × 103 1.0 × 104个细胞。请参阅安捷伦细胞分析出版物数据库,根据细胞类型查找细胞接种密度建议。XF HS迷你板通常可容纳XFe96XFp细胞培养板所需细胞数量的三分之一;

4.采用标准流程收集细胞,将细胞重悬于适当生长培养基中,计数,然后稀释至所需的接种浓度;

示例:收集和计数完成后,细胞浓度为7.5 ×105个细胞/mL。为达到预期接种浓度,稀释倍数为7.5 ×105个细胞/mL/1.0 × 105个细胞/mL = 7.5。对于一块 XF HS板,将100 µL细胞与650 µL生长培养基混合。

5.向孔B至孔G内的环状元件中加入30 µL细胞悬液,轻轻但平稳地按下推杆,将细胞悬液排出至单个XF HS迷你板孔中;

a.建议将20–200 µL(或更小规格)移液吸头与硅胶遮罩配套使用;

b.建议在XF HS 迷你板中一次接种一个孔的细胞,移液吸头必须伸入孔底部以确保正确排液(3)

3. 将移液吸头(蓝色轮廓)插入每个孔底部,排出细胞悬液。

6. A孔和H孔中加入30 µL生长培养基(不含细胞),作为背景校正孔;

:如果孔底形成气泡(4),可将板以200× g离心1–2分钟来去除气泡。

4. (A)(离心前)标出的孔底部有一个气泡,(B)(离心后)气泡在离心过程中排出。

重要信息:在室温下将板在超净工作台中放置一小时,对于某些细胞类型,这一过程可以促进细胞分布。

7.用显微镜监测贴壁情况;

8.在室温下放置一小时后,将细胞置于细胞培养箱中过夜生长。

注:XF HS迷你板与Agilent XFp迷你板托盘(部件号103057-100)兼容。

声明:仅供研究使用,不用于诊断性操作。

版权说明:版权归原作者及安捷伦细胞团队,本文内容部分来源于美国安捷伦科技公司官网(www.agilent.com)。如有问题请联系小编,欢迎批评指正,衷心感谢!

了解更多信息,请联系九游会官方网站企业西南区业务联系电话:028-86625230028-86625235Agilent 技术热线:800-820-3278 400-820-3278(手机)。

2021年5月13日 09:41
浏览量:0